RIPA lysis buffer는 빠르고 효과적을 세포를 lysis할 수 있고 단백질들을 안정화 하는 능력이 뛰어난 buffer이다. 그래서 mammalian cell을 lysis하는데 주로 사용되는 buffer이다. 이 buffer는 비특이적인 단백질의 결합을 최소화 하여 background가 적다는 장점이 있지만 SDC, SDS와 같은 detergent들이 포함되어 있으므로 단백질의 결합을 끊어 놓을 수 있다.
Tris-HCl역할 : 완충 역할을 수행한다. RIPA lysis Buffer 자체의 pH 변화를 최소화 하여 buffer의 기능이 유지되도록 한다.
IGEPAL CA-630 or NP-40역할 : Non-ionic detergent 이다. 즉, 약한 계면활성제로써 작용하며 인지질로 이루어진 세포막을 분해 시켜주는 역할을 수행한다. 다만 non-ionic detergent는 약한 detergent에 속해서 세포막을 깨는 능력은 약하지만 protein complex를 유지할 수 있기 때문에 단백질의 결합을 확인하기 위한 lysis buffer에서 많이 사용된다. 하지만 non-ionic detergent만으로 핵막까지 lysis하기에는 부족한 감이 있다. 따라서, RIPA lysis buffer에는 강한 detergent 들이 추가된다.
SDC & SDS역할 : RIPA lysis buffer에서 ionic detergent로 작용한다. 강한 detergent로 세포막, 핵막 모두를 lysis할 수 있다. Non-ionic detergent 보다 강하기 때문에 핵막 까지 모두 lysis가 가능하지만 protein interaction에 방해를 줄 수 있으므로 interaction을 확인하는 실험에서는 주의해서 사용해야 한다.
Protease inhibitor cocktail : 단백질을 분해하는 protease의 기능을 억제하여 세포막과 핵막의 lysis를 통해서 나온 단백질들의 안정화에 기여한다.
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